SPE回收率低的原因

一、SPE回收率低的主要原因

1. 目標(biāo)物未被有效保留（載入時(shí)流失）

柱的選擇與目標(biāo)物極性/性質(zhì)不匹配（如用C18柱萃取極性很強(qiáng)的物質(zhì)，導(dǎo)致直接流失）。

柱平衡不徹底（活性位點(diǎn)未被激活，保留能力下降）。

載樣時(shí)樣品強(qiáng)溶劑或體積過大，目標(biāo)物無法與固定相作用被直接沖走。

2. 目標(biāo)物在洗滌或漂洗步驟丟失

洗脫劑或洗滌劑的極性過強(qiáng)，把目標(biāo)物一同洗脫（如用含有機(jī)溶劑的洗滌液而目標(biāo)物極性較強(qiáng)）。

洗滌步方法不當(dāng)（體積太大或濃度不合適）。

3. 目標(biāo)物未能完全從固定相洗脫（殘留在柱上）

洗脫溶劑極性或強(qiáng)度不夠，目標(biāo)物洗脫不徹底。

溶劑選擇不合適，沒有破壞目標(biāo)物與固定相之間的作用力。

4. 目標(biāo)物在處理過程中降解或轉(zhuǎn)化

pH不當(dāng)，導(dǎo)致目標(biāo)物結(jié)構(gòu)變化或分解。

樣品長(zhǎng)時(shí)間暴露在高溫、氧化環(huán)境下，導(dǎo)致部分降解。

5. 柱容量不夠或柱污染

目標(biāo)物量太多，超出固定相容量。

固定相因污染、堵塞、重復(fù)使用，吸附能力下降。

6. 其他機(jī)械損失

轉(zhuǎn)移樣品時(shí)殘留、吸附在管壁、耗材上。

干燥/濃縮步驟揮發(fā)損失。

二、常見診斷與解決思路

問題表現(xiàn) 主要原因 解決辦法

上樣后幾乎測(cè)不到目標(biāo)物 固定相選擇不當(dāng)/上樣溶液太強(qiáng) 換合適的固定相或優(yōu)化上樣溶劑及動(dòng)力學(xué)

洗脫后目標(biāo)物含量明顯降低、峰消失 洗滌液帶出目標(biāo)物/洗脫不徹底 優(yōu)化洗滌液強(qiáng)度/選擇更強(qiáng)的洗脫劑/調(diào)整洗脫體積

目標(biāo)物濃縮干燥后回收率低 揮發(fā)、降解/管壁吸附 控溫緩慢濃縮/用惰性氣體吹干/管壁加保護(hù)劑，減少暴露時(shí)間

小分子極易流失 上樣體積大、溶劑極性強(qiáng) 調(diào)整樣品稀釋度、必要時(shí)預(yù)處理樣品

三、優(yōu)化建議

選擇合適的SPE固定相和類型

根據(jù)目標(biāo)化合物極性（極性/非極性/離子交換/特殊功能基團(tuán)）進(jìn)行選擇。

做平行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化固定相。

樣品溶劑與體積處理

上樣前用少量純水/流動(dòng)相稀釋樣品，降低有機(jī)溶劑比例。

控制上樣體積，盡量保證目標(biāo)物有時(shí)間與固定相充分結(jié)合。

嚴(yán)格優(yōu)化洗滌/洗脫條件

洗滌液不宜太強(qiáng)，防止目標(biāo)物流失，可分步增加有機(jī)相比例直至剛好不流失目標(biāo)物。

洗脫劑要足夠強(qiáng)，能夠準(zhǔn)確、高效解吸目標(biāo)物。

柱平衡和活化要充分

通常：有機(jī)相潤(rùn)濕 → 水活化 → 進(jìn)樣，操作過程中每一步都應(yīng)使用足夠體積通欄。

樣品處理溫度和pH控制

嚴(yán)格控制pH在目標(biāo)物穩(wěn)定區(qū)間，盡量在低溫避光條件下操作。

濃縮與轉(zhuǎn)移注意防損失

盡量避免樣品濃縮至完全干燥，或分步轉(zhuǎn)移可加洗。

若目標(biāo)物極易吸附，可在收集液加保護(hù)劑或表面活性劑。

四、簡(jiǎn)單排查方法

在上樣液、洗滌液、洗脫液分別測(cè)定目標(biāo)物含量，溯源丟失步驟。

用標(biāo)準(zhǔn)品做回收率測(cè)試和空白試驗(yàn)，判定是否有降解、吸附等非特異性損失。