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1. 含無機鹽緩沖液與高比例有機溶劑(如乙腈、甲醇)不可直接混合 比如:磷酸緩沖液、醋酸鈉緩沖液、硫酸鉀緩沖液等 與乙腈、甲醇直接混合,當有機相比例高于50%甚至更高時,許多無機鹽溶解度極低,會迅速析出沉淀。 沉淀會堵塞色譜柱、進樣器、管路和泵,造成設(shè)備損壞。 實驗中若需混合,必須確保無機鹽在有機相中的溶解度,并一般推薦總有機相比例低于30%。 2. 強酸和強堿流動相不能混用 如含鹽酸、磷酸的流動相與含氫氧化鈉、氨水的流動相混合,可能發(fā)生中和或沉淀反應(如磷酸鈣、磷酸鎂沉淀)。 不但影響分離效果,還會損壞色譜柱的填料和管路。 3. 含金屬離子的緩沖液與含硫化物或鹵素類試劑不可混用 易生成難溶沉淀(如AgCl、CuS),導致管路和柱堵塞。 4. 不同有機溶劑混合前要注意互溶性和比例 如乙腈、甲醇、異丙醇等一般互溶,但高濃度或混合其它成分(如緩沖鹽),有時會出現(xiàn)微相分離或析晶現(xiàn)象。 5. 醋酸銨、甲酸銨、三乙胺等緩沖劑在高比例異丙醇等有機溶劑中溶解度低 使用時應查詢?nèi)芙舛?,否則高比例有機相下可能形成析出。 6. 部分流動相在強度變化或系統(tǒng)沖洗時也容易出現(xiàn)問題 比如用磷酸鹽緩沖液的方法分析后,直接用純乙腈沖洗系統(tǒng),易在管路或接口處產(chǎn)生鹽析。 應先用純水洗去鹽,再用有機溶劑沖洗。 典型不能混用組合舉例 流動相A 流動相B 現(xiàn)象/問題 磷酸鹽緩沖液 乙腈、甲醇 鹽沉淀,堵塞系統(tǒng) 醋酸鈉緩沖液 乙腈、高異丙醇 鹽沉淀 鹽酸或磷酸 氫氧化鈉/氨水 沉淀、pH急劇變化 金屬離子緩沖液 含硫試劑、鹵素 難溶金屬鹽沉淀 醋酸銨、甲酸銨 高比異丙醇、有機溶劑 緩沖劑低溶解度沉淀 |
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